蛋白Marker，你需要了解这些！-华海博客

卵白Marker，你必要了解这些！

卵白Marker界说和用处

卵白Marker：即卵白分子量标准，是一些已知分子量的卵白质的殽杂物，像“尺子”一样用来指示卵白质条带的轻重。

在Western Blot历程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样固然是此中小小的一环，但是就是如此一个小细节对实行后果有着不成无视的作用。Marker的作用主要是用来指示卵白条带所对应的分子量轻重，仅有标准量准确无误了，实行后果才有压服力，除此之外，卵白Marker另有体现转膜对否告捷、以及卵白在凝胶上的电泳水平等作用，因此选择准确的卵白Marker也是Western Blot实行告捷的必要条件之一。

卵白Marker的分类

总体来说，现在最常用的卵白Marker分为非预染卵白Marker和预染卵白Marker。

非预染卵白Marker

是几种已知分子量并纯化好的卵白质预混液，便利不同轻重的卵白比力。非预染的Marker使用上不如预染Marker好用，由于电泳历程中完全看不到，电泳完毕后颠末卵白染色后才干起指示作用，无法在实行历程中起预示参照作用，属于“后知后觉”型的。但是由于卵白没有附带染料分子大概是标志分子，所示轻重恰好是卵白原本的轻重，以是比力准确，可以准确推断卵白轻重。

预混的Marker通常有几条带愈加浓度作为指示，由于殽杂的条带越多，越不佳记，谁晓得哪条是那条！数到眼都花了。以是当看到特别浓的那几条标志带就记得是何处了。不外要记得，小带通常都不那么容易看清晰的。在选择上去说，固然是选择此中最少有一条条带和本人的目标卵白轻重相近的最好，越近越好。

预染卵白Marker

预染卵白Marker是纯化好的一些卵白，经过与染料共价耦联后殽杂在一同，在电泳历程中大概转膜时可以直接察看到。

预染卵白Marker的显现便利了我们的实行，这种卵白分子量标准可以协助我们在电泳时、电泳后，以及转膜后监测电泳情况和估测迁徙率——好比，已知垂直电泳最佳区分地区约莫在胶的2/3处，假如使用预染Marker就可以猜测目标卵白进入最佳区分区时中止电泳以取得最佳区分后果；假如察看到Marker电泳特别也可以及时停止电泳；别的在Western Blot转膜今后可以直接察看卵白转膜对否完全，还可以在膜上标志卵白分子量，以是吸引了很多实行室职员置办预染卵白标准。

值得注意的是，预染卵白Marker与染料共价耦联，以是在不同的缓冲条件下电泳时迁徙特性约莫会产生某些厘革，约莫招致一些偏差，以是不太合适准确定位卵白——不外大多情况下Marker的条带未必能和我们的目标卵白完全一样，我们取得的也不外是一种相对Marker指示的参考轻重，最初都必要Western来定性，以是假如不是要区分轻重相近的条带，预染Marker照旧很好用的，并且也可以和未染色的卵白标准一同使用。

预染卵白Marker的分类

预染卵白Marker又分：单色预染和多色预染，单色预染卵白Marker通常会使用此中某些条带愈加浓度加深某些条带的粗细，来提示其轻重的，便利我们快速影象和区分各个条带的轻重。而美丽卵白Marker则用不同的颜色来区别，就愈加好识别啦。并且假如闷声的电泳实行中跑出多彩的彩虹Marker，此时心境想必会愉快一些！

除了外表先容的，市面上另有一些其他典范的卵白Marker：如荧光卵白Marker、生物素化Marker、显影卵白Marker等…。

别的，卵白Marker按分子量范围又分为高分子量、低分子量、宽分子量几类。检测大分子量卵白常常使用到高分子量范围Marker，检测小卵白乃至是一些多肽常会用到小分子量范围Marker。假如从整个实行室思索，选宽分子量、条带分布比力匀称的Marker，如此你的卵白无论在哪个区间都容易推断。

Marker的一些成绩

一、marker一定要都跑出来吗？

好比说分析书上市7条带，但是跑出6条带是正常的,约莫是跑的时间不够,假如你的卵白不是很小的话,可以等溴酚蓝前沿刚跑出胶的时分再关电泳仪,如此应该可以有7条带.有的时分还会跑出5条,不外只需在你的目标卵白的上下两个带都跑出来了就可以了,不一定非要7条。

二、marker变成笑容状怎样办？

第一，胶没有压片

第二胶在板的边沿与中央的胶的活动性约莫不同，这个没有办法，跟黏度和外表张力有关。假如种种办法都不克不及处理外表的征象，一局部发起maker换一条道上样，选一条接近正中的泳道跑一跑。

边沿效应，在边沿两个泳道的样品会如此的。可以试试电泳速率慢点儿……

要么配胶时没压好，胶没配好，要么电泳时电压太大，电渗力强，要么玻板电泳时没夹好，内电泳液是漏的，请逐一排查。

三、marker条带变宽怎样处理？

缘故一：上样量过多，应该变小上样量。